狗狗cpv试纸怎么测?
现在犬瘟热病毒检测方法有:血清学试验、PCR和核酸探针三种,其中以PCR最为敏感,目前已成为诊断该病的金标准[1] 。
由于血清学检验的检出率较低且存在假阳性现象,所以一般不用做初检;而PCRPNA探针虽然灵敏度高,但技术较为复杂且成本较高,难以在中小型实验室推广使用。因此,临床上最可靠有效的办法还是采用PCR法进行检测,但是这一方法的特异性不高,在犬科动物中普遍存在该病毒的抗体,所以还需要进一步对PCR产物进行克隆和分析才可以得到可靠的结论[25] 。本实验根据GenBank上公布的CSFV标准毒株GP07株的ORF2基因序列设计出一套引物来扩增该基因上的460bp片段,并以此为模板构建了重组质粒pMD19-TM,利用PCR法成功检测出了CSFV感染的犬粪便样本。
本文所设计的引物可以用于临床样本中犬细小病毒的快速筛查。为临床及预防工作提供了一定的参考依据!
1.材料与方法
1.1.试剂与仪器
1.1.1. 主要试剂
TRIzol(Invitrogen公司);AMV反转录酶、RNaseH(Promega公司); dNTPs、Oligo(dT)18(宝生物工程(大连)有限公司);DL2000DNAMarker(上海华舜生物工程有限公司);Taq DNA聚合酶(北京索莱宝科技有限公司);pMD19-T载体(TaKaRa公司);dNTPS(上海生工生物工程技术服务有限公司):PCR纯化回收试剂盒(上海英骏生物技术有限公司);E·coliDH5α菌株由本实验室保存。
1.1.2. 主要仪器设备
电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);PCR仪(美国BioRad公司);高速冷冻离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);凝胶成像系统(北京六一医疗器械厂)。